Área de Preparación:
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes básicos o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:
- Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad.
- Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica adecuada.
- Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.
- Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.
- Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.
El area de preparación de medios debe estar equipada con:
Área fisica de 4.6 X 3.6 metros.
Lava platos.
Calidad y dirección del aire.
Libre de contaminantes.
Equipos:
Nevera (independiente).
Incubadora.
Destilador.
Desionizador.
Agitador magnético con imanes y plancha de calentamiento.
pH- metro 5.6 - 5.8.
balanza, graneras y de precisión.
Estufa eléctrica.
Autoclave (medios, equipos de disección y atuendo).
Dispensador de medio de cultivo.
Estantería, vidrieria y material de plastico.
Reactivos:
Macrosales (cantidades grandes).
Microsales (cantidades pequeñas).
Sacarosa.
Gelificante.
Fitohormona (citoquininas, giberelinas, auxinas).
Antibióticos.
Carbón activado (oscurece el medio de cultivo).
Área de Esterilización:
El área de
esterilización, puede estar constituida por dos áreas conectadas entre si, o
por un solo ambiente, y puede estar localizada dentro del área general de
preparación.
El área de lavado debe
incluir por lo menos un lavadero grande con agua caliente y agua fría y una
fuente de agua de alto grado de pureza, preferiblemente agua doblemente
destilada ; para el efecto se debe utilizar un destilador de vidrio o de
material no toxico y un desionizador de agua colocado entre el destilador
y el lavadero. esta area debe disponer de un espacio para almacenar agua
destildada en botellas de plastico; tambien debe proveer basureros adecuados
para el material vegetal, inorganico y de vidrio que se deseche.
el area
de esterilización debe de tener espacio para el autoclave vertical u
horizontal, el cual puede ser pequeño (olla de presión) o grande (de carga
frontal y de enfriamiento lento y rápido), según sea el volumen
del material que se procese. esta área también puede incluir
espacio para estufas, secadoras, y un lavadero con agua caliente y fría.
Esterilización: Es la
completa destrucción o eliminación de toda forma de
vida.
Métodos de esterilización:
a) Calor:calor seco
calor húmedo
b) Agentes químicos: gases
(óxido de etileno),
glutaraldehído, formaldehído
c) Filtración:
Filtros de membrana
Cámara de flujo laminar
d) Radiación:
radiación
ionizante y no ionizante
a) Calor seco
Mecanismo de acción Procesos de oxidación y
desnaturalización de proteínas.
Control del proceso Indicador biológico esporas de Bacillus subtilis
Aire caliente
Se consigue esterilización a 170ºC, 60 minutos o 160ºC
a120 minutos
Usos:
Esterilización de materiales resistentes al calor, sustancias no
miscibles en agua (inyectables oleosos,
siliconas, vaselina líquida), polvos
Incineración: Flameado (>500 ºC)
a) Calor húmedo
Procesos:
Vapor saturado a presión mayor que la
atmosférica
(Autoclave)
Tindalización
Mecanismos de acción:
Desnaturalización de proteínas
Destrucción de ácidos nucleicos
Autoclave
Vapor saturado a temperaturas mayores de
100ºC (precaución:
eliminación total del aire)
Esterilización de materiales termoestables
(salvo productos oleosos y
polvos)
Descontaminación de desechos biológicos
Condiciones:
121ºC durante15 min., con cargas iniciales
bajas
121ºC durante 30 min., con cargas iniciales
altas
Indicadores:
Físicos: temperatura y/o presión
Químicos
Biológicos: Geobacillus stearothermophilus
Tindalización
100ºC 30 minutos, 3 días sucesivos
Proceso discontinuo con períodos de incubación
intercalados
Usos: esterilización de productos de baja
resistencia
térmica, cuando no existe
otra opción
Otros procesos de control por calor húmedo
Pasteurización
LHT (low temperature holding) 30 minutos a
62.8ºC
HTST (high temperature short time) 15 segundos
a 71.6ºC
Solo destruye
patógenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium tuberculosis, etc.) y reduce flora de deterioro.
Usos:
leche,
lácteos, jugos de fruta
UHT (Ultra high
temperature) 140-150ºC durante
pocos segundos
Proceso continuo
Necesita envasado
aséptico
b) Filtros de membrana
Se emplea para materiales sensibles al calor: medios de cultivo,azúcares, soluciones de antibióticos, etc
b) Cámara de flujo laminar
Protege la
muestra, el operador y el medio ambiente
Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air)
Remoción de hasta el 99.97%
de partículas mayores a
0.3 micrones de diámetro
d) Radiación
Radiación Ionizante
Alta energía, baja
longitud de onda
Gran poder de
penetración
Produce e-,
radicales hidroxilo (OH) e hídrido (H) que degradan ácidos nucleicos y proteínas
No requieren altas
temperaturas
2 tipos Rayos
gamma (160Co ó137Cs)
Rayos beta
Usos:
esterilización de suministros médicos, industria alimentaria, turba para inoculantes
Radiación no ionizante
Baja energía, sin
poder ionizante
Sin poder
penetrante
Máxima eficiencia
biocida a 260 nm
Mecanismos de
acción:
Sitio blanco ADN
Formación de
dímeros de timina
Usos:
Desinfección de
superficies
Desinfección de
aire y agua
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