La hibridación de acidos nucleicos
La hibridación es la unión complementaria de ácidos nucléicos (ADN o ARN). Técnicas dehibridación se utilizan a menudo para detectar una molécula diana partiendo de una sondacomplementaria a ella, también se usan habitualmente en el diagnóstico de enfermedades, laidentificación de microorganismos patógenos, el estudio de perfiles de expresión génica, lalocalización de genes en cromosomas o de ARNm en tejidos (hibridación in situ) o en lacomparación de especies hibridando su ADN. Se parte de dos poblaciones de ácidos nucléicos: un conjunto homogéneo de ácidos nucléicos desecuencia conocida que actúa como sonda y otro conjunto heterogéneo de ácidos nucléicos desecuencia desconocida donde queremos detectar la secuencia diana. Una de ellas debe estarmarcada. Si lo está la sonda, la hibridación es estándar. Si lo está la diana, la hibridación esreversa. Los ácidos nucléicos de partida son de cadena sencilla, bien procedentes de ADN clonadoy fragmentado por enzimas de restricción, bien oligonucleótidos sintéticos. Durante la hibridaciónse produce la unión de las moléculas diana con las moléculas sonda. Esta unión depende de lacomplementariedad de bases. Así, aumentando la fuerza iónica (por ejemplo, la concentración decloruro sódico NaCl) o disminuyendo la temperatura se permite la hibridación aunque existanalgunas bases no complementarias.
TECNICAS DE HIBRIDACION
Hibridación in situ con filtro (HISF).
La Hibridación in situ sobre filtros (FISH) es más rápida que el Dot - Blot ya que no se realiza la extracción de DNA. Es poco específica, pero es útil para estudiar con gran número de muestras. La Hibridación in situ es una técnica relativamente rápida y accesible a los laboratorios de diagnóstico si se utilizan sondas no radiactivas. En este caso, se obtiene una coloración específica en los núcleos positivos, fácilmente observable en un microscopio óptico de rutina.
Esta técnica permite trabajar con pequeños fragmentos de tejidos. Si bien no distingue subtipos ni permite caracterizar nuevos tipos virales, es el único método que hace posible observar en forma conjunta la arquitectura del tejido y la presencia y distribución del DNA viral. Es también de gran utilidad en diagnósticos retrospectivos de muestras histológicas de archivo (27)
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