2.1.2.2. Equipos de Laboratorio

Fuente: http://es.scribd.com/doc/3246492/Material-de-laboratorio

2.1.2.1. Material de Laboratorio

El material de vidrio usado para realizar investigaciones o reacciones químicas debe ser fabricado con materiales resistentes a la acción de los agentes químicos. Se utiliza bastante material de vidrio en la preparación de medio de cultivo y en la siembra de tejidos vegetales. El material que se seleccione deberá ser de alta calidad, resistente a altas temperaturas y a ácidos y no liberar sustancia alguna, especialmente aquélla que es utilizada en la conservación de soluciones madres. El vidrio corriente no sirve para la fabricación de instrumentos de laboratorio por ser muy frágil y vulnerable a los agentes químicos y físicos. Por tal razón se construyen de cristal de vidrio, pudiendo ser este de vidrio grueso o delgado.

Los materiales de plástico pueden ser de uso múltiple, p ej. Las probetas, matraces, vasos de precipitados, las placas de petri. El plástico ofrece algunas ventajas frente al vidrio, es resistente a la rotura, tienen un peso bajo. Los utensilios de plástico de laboratorio son monómeros orgánicos polimerolarizadas. Hay gran variedad de plásticos, van a tener distintas propiedades físicas y químicas. Cuando se utiliza un plástico hay que tener en cuenta el tipo de plástico que se emplea porque algunos plásticos pueden ser atacados por disolventes.

Fuente: http://es.scribd.com/doc/3246492/Material-de-laboratorio

2.1.2. Material y Equipo de Laboratorio

Para el desarrollo de la investigación y docencia, en el campo del cultivo de tejidos, se requieren de materiales que permitan la preparación de fórmulas nutrimentales con el objetivo de cultivar tejidos, órganos y células vegetales in vitro. Es muy importante que los materiales y equipos de uso común en el laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso especifico que tiene cada uno, pero más importante es saber manejarlo correctamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para el uso de aquellos que así lo requieran.

TAREA: MEDIOS DE CULTIVO INDEFINIDOS

Cuando no es decisivo conocer la composición exacta del medio de cultivo se utilizan medios indefinidos, naturales o complejos.

Acontinuación 5 ejemplos de medios de cultivo indefinidos:

1. Agar, frijol, lima

• Frijol lima molido 100 g
• Agar-Agar 20 g
• Agua destilada para completar 1000 ml.

Procedimiento:

Se remojan los frijoles (Phaseoluslimensis) por 30 minutos. Se hierven por 30 minutos a baño maría con suficiente agua; se filtra el agua a través de una gasa; se coloca el líquido nuevamente en baño maría, se agrega el agar y se agita el líquido hasta que el agar se disuelva, se restaura el volumen del líquido hasta 1000 ml con agua destilada.

2. Preparación de Agar con extracto de trigo, paja y malta.

• Semillas de trigo 400 g
• Extracto de malta 10 g
• Paja de trigo 100 g
• Agar-Agar 15 g
• Dextrosa 10 g

Procedimiento: 

Hervir el trigo en un litro de agua, dejando consumir el líquido hasta aproximadamente 500 ml, esto mismo se hace con la paja. Se filtran ambos extractos y se mezclan en un recipiente, se agrega los demás ingredientes y se le adiciona agua hasta ajustar un litro, esta suspensión se calienta hasta disolver todos los ingredientes.

3. Preparación de Agar con Papa dextrosa

• Papa 200 g
• Agar-Agar 15 g
• Dextrosa o glucosa 20 g
• Levadura 2 g

Procedimiento: 

Pelar y poner a hervir la papa en 500 ml de agua destilada o purificada durante 10-15 min. El extracto se filtra y se adiciona más agua hasta ajustar 1000 ml para reponer lo que se evaporó. Se agrega los otros ingredientes y se calienta a fuego lento moviendo constantemente durante 1-2 min hasta que queden totalmente disueltos.

4. Preparaciòn de Agar con extracto de malta

• Extracto de Malta 10 g
• Agar-Agar 15 g

Procedimiento:

Se pesan los ingredientes y se mezclan en el matraz con 1000 ml de agua destilada. La suspensión se calienta y agita hasta que queden totalmente disueltos los ingredientes.

5. Agar harina de maíz

• Harina de maíz 20 g
• Dextrosa 20 g
• Agar 20 g
• Agua destilada hasta completar 1000 ml

6. Agar jugo V-8

• Jugo V-8
• Carbonato de calcio
• Agar-Agar
• Agua destilada

Fuente:

Antonie Van Leeuwenhoek. 35 (Suppl): pp. G27-8... Jun 1969.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/5312005ordinalpos=&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.SmartSearch&log$=citationsensor. Consultado el 1 de marzo de 2012.

2.1.1.4. Área de Incubación

En esta área es donde permanecen los medios sembrados con explantes para su desarrollo y crecimiento. El área de incubación debe proporcionar un buen control de la temperatura (20-28ºC) , la iluminación, la cual puede ser variable y la humedad relativa. El área de estar libre de agentes contaminantes para que no intervengan en el crecimiento del cultivo. En esta área se debe controlar la temperatura, para lo cual se puede hacer uso de aparatos de aire acondicionado, para evitar el recalentamiento.

Área de cuarto de crecimiento

Área física de 5.4 X 3.6 metros.

Aislado a temperaturas entre 24 a 29ºC.

Humedad relativa entre 70 a 80%.

16 horas luz por 8 horas de oscuridad.

Electricidad en 110V y 220V.

Seguridad contra incendios o calentamiento excesivo.

Superficies lavables y desinfectables.

Iluminación en techos y estanterías.

Acceso restringido.

Equipos:

Temporizador.

Aire acondicionado o extractor de aire.

Sistema de inmersión temporal.

Planta eléctrica.

Estantería.

Lámparas.

Reactivos:

Alcohol antiséptico 70%.

Hipoclorito de sodio.

Hipoclorito de calcio.

Fuente: ROCA,  M.W.  1991, CULTIVO DE TEJIDOS EN LA AGRICULTURA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES, EDIT. XYZ, CALI COLOMBIA. PAGINAS. 3-7.

2.1.1.3. Área de Siembra Aséptica

En esta área se realizan el trabajo de excisión, inoculación y transferencia de los explante a los medios de cultivo. Este trabajo demanda los más altos niveles de limpieza ambiental, se recomienda la instalación de gabinetes de flujo horizontal o vertical de aire filtrado o bajo presión o la construcción de cuartos de transferencia. Sin embargo, ciertas operaciones de inoculación como la excisión y el cultivo de ápices y meristemas en tubos de ensayo de boca angosta, se pueden realizar sobre una mesa limpia, ubicada en un lugar del laboratorio libre de corrientes de aire y de polvo. Los gabinetes de flujo laminar deben ubicarse en lo posible en un lugar alejado de las puertas y con un mínimo de corriente de aire, con el fin de prolongar la vida útil de los filtros. 

Esta area debe de estar limpia, diseñada y construida correctamente para minimizar la contaminación por partículas viables y no viables y mantenerla dentro de límites preestablecidos. Cuando se trabaja con cultivos microbianos, la técnica aséptica se utiliza para prevenir la introducción de organismos adicionales al cultivo. Un ambiente propicio para el desarrollo de microorganismos es el conjunto medio de cultivo – explante, pudiendo destruir tales cultivos; por lo cual es necesario evitar los contaminantes.

Área física de 2.4 X 3.6 metros

Aislada con pocas corrientes de aire, alejado de puertas.

Superficies lavables y de fácil desinfección.

Mesones.

Estantería.

Equipos:

Cabinas de flujo laminar.

Mechero.

Estereoscopio.

Equipo de disección.

Carro.

Reactivos:

Alcohol antiséptico 70%.

Hipoclorito de sodio.

Agua destilada y estéril.

Fuente: http://www.buenastareas.com/ensayos/Laboratorio-Cultivo-In-Vitro-Vegetales/2865929.html

             http://natalymosquera.blogspot.mx/

2.1.1.2. Área de Almacenamiento

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor. 

Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorción de agua produce cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios químicos o estar contaminados. 

Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15ºC. Sin embargo, almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8°C se prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación y cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura de papel (Craft). 

Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia, pH, etc.) y microbiológicas (esterilidad y promoción de crecimiento) verificando que cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso.

Fuente:http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Preparaci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf